girniy.ru 1







Программируемые параметры измерений при использовании фотометра

«Bio-Rad 680»


Предназначен для измерения оптической плотности содержимого лунок 96-луночных планшетов

  • Оптическая схема фотометра 8-ми канальная

  • диапазон измерения от 0 до 3,5 ед

  • Способен измерять на одной или двух длинах волн, как однократно так и многократно в кинетическом режиме

  • В комплект поставки входят фильтры 415, 450, 490 и 655 нм

  • Точность измерения до третьего знака после запятой

  • Имеет возможность встряхивания планшетов перед измерением

  • Может управляться как посредством внутреннего ПО, так и с помощью внешнего компьютера с ПО Microplate
    Manager (BioRad)

  • Оба ПО предоставляет возможность построения калибровочной кривой и рассчета концентраций аналита с помощью 10-ти различных методов

  • Распечатка результатов проводится либо встроенным принтером либо внешним принтером в зависимости от комплектации

В нашем случае мы имеем дело с комплектацией «внутреннее ПО + внешний принтер»

Типы протоколов считывания

Таблица 1

Тип считывания




End Point



Однократное по конечной точке. Используется для работы с тест-системами Алкор Био

Kinetic

Многократное считывание через заданные интервалы. Позволяет оценить кинетические параметры реакции. Для работы с тест-системами Алкор Био НЕ используется


Checkmark

Протокол для калибровки и настройки прибора. Только для специалистов!

Вид данных выводимых на печать (для протокола End
point)

Таблица 2

Название

Сокращение

Описание

Raw data report

Raw



Нескорректированная оптическая плотность (ОП), без вычитания фоновой ОП, т.е. «бланка»

Absorbance report


Abs



ОП образца за вычетом «бланка». В этом случае вычисляется средняя ОП лунок, обозначенных как «бланк», и полученная величина вычитается из набора нескорректированных ОП остальных лунок.




Limit report


Lim


Предел. Вывод результатов в качественном формате типа ДА/НЕТ. При этом:

(*)- лунки с ОП между верхним и нижним заданными пределами

(+) - ОП больше верхнего предела

(-) – ОП меньше нижнего предела

Matrix report


Mtx

Матричный способ представления данных. Дает качественный способ оценки величины поглощения в лунках планшета. При этом область значений поглощений, заданная верхним и нижним пределами, делится на 10 равных частей, которым присваиваются номера от 0 до 9.

Величина поглощения каждой лунки выдается номером соответствующей части. (+) - ОП больше верхнего предела

(-) – ОП меньше нижнего предела


Cutoff report


Cut



(если необходимо)

Режим отсечки. Качественный способ оценки поглощения или пересчитанных концентраций по сравнению с пороговым значением. Программное обеспечение фотометра позволяет выполнить данную обработку в четырех вариантах (см. стр 9-12 Инструкции). Для использования с тест-системами Алкор Био выбирайте Single Cutoff Constant (см стр 10 Инструкции).

Curve fit report


Crv










Калибровочная кривая

Этот вид обработки данных предоставляет возможность провести регрессионный анализ на основе значений ОП набора стандартов.

Внутреннее программное обеспечение фотометра поддерживает 10 типов

калибровочных функций:

i.5P Logistic Rodbard

ii. 4P Logistic Rodbard

iii. 5P Logistic Cook-Wilkenson

iv. 4P Logistic Cook-Wilkenson

v. 5P Exponential

vi. Sigmoid Logistic

vii. Linear regression

viii. Quadratic regression

ix. Cubic spline

x. Point To Point regression

Внутренняя программа подбирает оптимальный вариант аппроксимационной функции концентрации от величины ОП. Кроме графика функции также распечатываются значения коэффициента регрессии, коэффициента корреляции и значения стандартных ошибок.


Внимание! График выводится на печать только на встроенный принтер! На внешний принтер график на печать не выводится!


Concentration report


Cnc



Концентрации.

В случае выбора варианта калибровочной кривой, в этом режиме также проводится регрессионный анализ. После построения калибровочной кривой вычисляются значения концентрации образцов, которые выводятся на принтер.

В случае же применения режима отсечки (Cutoff), программа распечатывает концентрации каждой лунки.

Difference report


Dif

Расчет разностей величин поглощения. В этом режиме результатом обработки является разность между соседними

колонками или рядами лунок.


ЭТАПЫ ПРОГРАММИРОВАНИЯ

  1. Включение прибора. Самотестирование. 3 мин на прогрев перед измерением.

    • Ввести пароль (по умолчанию – 00000). Пароль пользователя или Администратора.

    • Выходим в главное меню. Клавиша MAIN. Высвечивается активный протокол. Чтобы его сменить – Вызов из памяти MEMORY RECALL (см пункт 2). Завести новый протокол можно путем переименования и/или редактирования существующего протокола. В главном меню нажать кнопку EDIT Появится Меню редактирования конфигурации прибора Protocol End Point Protocol (далее см пункт 3)
  2. MEMORY RECALL. Режим вызова из памяти. Из памяти можно вызвать протоколы или данные. В режиме End point в памяти хранятся 64 протокола и 10 последних измеренных планшетов (данные).


  3. EDITING END POINT PROTOCOL

    • CUTOFF

      1. NO USE – когда не используем cutoff

      2. CONSTANT- в наборах, где используют cutoff

    • REPORT. Вид данных, которые будут выводится на печать. Выбираем позиции, помеченные в Таблице 2. Для подтверждения выбора каждого из пунктов меню нажимаем кнопку Change.

    • LIMIT. Верхний и нижний пределы ОП, которые будут учитываться при вычислениях. Фотометр выводит на дисплей абсолютную величину ОП до 3.500. Если абсолютное значение ОП превышает 3.500, на дисплее оно будет в форме “*.***”, либо “-*.***”. Например, если ОП = 4.500, на дисплее будет “*.***”, а если ОП = -4.500, то “-*.***”. Обычно задают пределы 0-3.5.

    • STDs. Стандарты.

      1. STD information

        1. Number of standards –Число стандартов

        2. Concentration – Концентрации стандартов

        3. Units –Единицы измерения. Выбор из списка.

  • Curve fit setting. Выбор способа построения кривой

            1. Curve fit type. Выбор из 10 вариантов калибровочных функций. Выбираем 5P Logistic Rodbard или 5P Logistic Cook-Wilkenson.

            2. Graph axis. Выбор осей калибровочного графика. Предлагается 4 варианта осей. Выбираем линейные.

  • Recall STD curve. Вызов кривой из памяти.

При работе с тест-системами Алкор Био калибровочную кривую следует ставить на каждой плате! Открытие по сохраненным в памяти калибровочным кривым недопустимо!!! Выбираем NO.


  • Mode. Параметры прибора.

                  1. Set photo mode. Параметры фотометрирования :1 или 2 длины волны, выбор фильтров. Вибираем Single и длину волны 450 нм.

                  2. Set shaking. Шейкирование.

Shake – Yes

Speed- Mid (средняя скорость)

Time - 60 sec

            1. Set read mode.

1.Reading speed. Скорость перемещения планшета при измерении:

Fast- быстро, Step – пошагово. Выбираем Fast

2. Read mode. Normal mode – планшет измеряется 1 раз

Eval mode – среднее по 4 измерениям планшета

Выбираем Normal

iv. Incubation –Этой функции нет в данном фотометре

  • MAPPING. Select mapping mode. Карта планшета. Выбираем Manual mapping.

  1. Ручное программирование карты планшета

Типы лунок


Индикация на экране

Клавиша

1. Blank (Фон)

2. Sample (Образец)

3. Standard (Калибровочная проба)

4. Positive Control (Положительный контроль)

5. Weak Positive Control (Слабоположительный контроль)

6. Negative Control (Отрицательный контроль)

7. Cutoff Control (Контроль cutoff)

8. Calibrator (Калибратор для поверки)

9. QC Control (Материал для контроля качества или контрольная сыворотка)

10. Empty well (Пустая лунка)

B

X00…X99

S01…S99

CP0…CP9

CW0…CW9


CN0…CN9

CO0…CO9

CL0…CL9

QC0…QC9


-

2/BLK

1/SMP

3/STD

7/CP

9/CW


8/CN

4/CO

6/CAL

5/QC


0/EMP

Существует два режима использования клавиатуры для программирования карты планшета:

- ввод типов лунок с использованием обозначений типов лунок и

- ввод индексов для заданных типов цифрами, нанесенными на клавишах. Активный режим высвечивается в верхнем левом углу экрана. В случае определения типов лунок высвечивается [F], в режиме же ввода индексов для типов лунок с использованием цифровых клавиш - [N]. Вид курсора также отличается в зависимости от выбранного режима ввода. Например, вид курсора [S01] соответствует вводу типов (идентификаторов) лунок, а ¦S01¦ - соответствует вводу численных индексов, с использованием цифрового обозначения типов лунок. Режим может быть легко изменен нажатием клавиши с десятичной точкой.


ii. Auto-mapping. Не используем. Доступна только одна карта планшета.


  • Kit name setting – Название протокола. Вводим с помощью клавиш со стрелками.

Меню редактирования конфигурации прибора (продолжение)

В главном меню нажать кнопку EDIT:

  • SECURITY – смена паролей и пользователей

  • LOCK\UNLOCK - закрытие протокола для редактирования

  • FILTER SETTING- положение фильтров на карусели

  • DATE SET – настройка календаря

  • LAB NAME – изменение названия лаборатории.